R2A瓊脂培養基用于純化水中菌落總數的測定，（EP、USP、Chp標準）

配方：

酵母浸出粉          0.5

蛋白胨                0.5

酪蛋白水解物       0.5

葡萄糖                0.5

可溶性淀粉          0.5

磷酸氫二鉀          0.3

無水硫酸鎂       0.024

丙酮酸鈉             0.3

瓊脂                 15.0

pH值7.2 ± 0.2    25℃

 

調整PH值，使得R2A瓊脂滅菌后的PH值為7.2±0.2。使用高壓鍋，121°C下高壓滅菌15分鐘。

 

不同藥典關于純化水的微生物檢測方法和質量標準

中國藥典

    【檢查】 微生物限度 取本品不少于 1ml，按薄膜過濾法處理后，采用 R2A 瓊脂培養基，30～35℃培養不少于 5 天，依法檢查（通則 1105），每1ml 供試品中需氧菌總數不得過 100cfu。

操作簡述：

    除葡萄糖、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節 pH 值使加熱后在 25℃的 pH值為 7.2±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。 R2A 瓊脂培養基適用性檢查試驗 照通則 1105 中“計數培養基適用性檢查”的胰酪大豆胨瓊脂培養基的適用性檢查方法進行，試驗菌株為銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌。應符合規定。

USP標準

    在美國藥典中，推薦使用0.45μm薄膜過濾法，并同時使用高營養培養基（平板計數瓊脂培養基（PCA））于30-35℃培養72小時以上，和低營養培養基（R2A瓊脂）于20-25℃培養96小時以上。檢測標準為：≤100cfu/ml 。

操作簡述：（可根據實際情況調整）

    量取10ml充分混勻的水樣，以無菌操作加入安裝好的薄膜過濾器內，過濾。并用 pH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml,共沖洗1次。過濾后，取出濾膜，正面朝上貼于瓊脂平板上。共制備 2張濾膜，一張濾膜貼于平板計數瓊脂培養基平板（高營養培養基）置30℃~35℃生化培養箱中倒置培養2~3天，計數。另一張濾膜貼于R2A瓊脂平板（低營養培奍基），置20℃~25℃生化培養箱倒置培養5~7天，計數。以培養基平板上菌落數生長較多者作為檢測結果， 按比例折算為1ml純化水中的微生物數量后報告。

EP標準

    在歐洲藥典中使用薄膜過濾法（0.45μm 孔徑濾膜），使用 R2A 瓊脂培養基在 30℃～35℃培養 5 天以上。 質量標準：≤100cfu/mL。

操作簡述：（可根據實際情況訓整）

    量取 10ml 充分混勻的水樣，以無菌操作加入 安裝好的薄膜過濾器內，過濾。并用 pH7.0 的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜,每張濾膜 每次沖洗量為 100ml，共沖洗 1 次。過濾后，取出濾膜，正面朝上貼于 R2A 瓊脂平板上, 置 30℃～35℃生化培養箱中倒置培養 5 天，計數。按比例折算為 1ml 純化水中的微生物數量后 報告。